Manipulação de DNA

Código:

BIOL4001

Sigla:

BIOL4001

Áreas Científicas
Classificação	Área Científica
OFICIAL	Biologia

Ocorrência: 2021/2022 - 1S

Ativa?	Sim
Unidade Responsável:	Departamento de Biologia
Curso/CE Responsável:	Mestrado em Biologia Funcional e Biotecnologia de Plantas

Ciclos de Estudo/Cursos

Sigla	Nº de Estudantes	Plano de Estudos	Anos Curriculares	Créditos UCN	Créditos ECTS	Horas de Contacto	Horas Totais
M:BFBP	14	Plano de Estudos M:BFBP_2015_2016	1	-	6	42	162

Língua de trabalho

Português - Suitable for English-speaking students

Objetivos

Fornecer conceitos avançados sobre manipulação de DNA, tecnologia de DNA recombinante, PCR, clonagem e suas aplicações na transformação genética de plantas, na perspectiva de obtenção de proteínas recombinantes. Utilização de ferramentas básicas de bioinformática no planeamento experimental para a obtenção de proteínas recombinantes (BLAST search, análise de sequências, optimização de genes, desenho de primers). Prática laboratorial incidindo na clonagem de genes em vectores de expressão adequados contendo tags e proteínas de fusão, e transformação de estirpes bacterianas geneticamente adequadas.

Resultados de aprendizagem e competências

Compreensão da lógica experimental para produção de proteínas recombinantes e dos processos moleculares subjacentes como regulação da expressão genética. Conhecimento das técnicas de manipulação molecular envolvidas na produção de proteínas recombinantes. Utilização de ferramentas básicas de bioinformática para análise de sequências, optimização de genes e desenho de primers.
Competências laboratoriais em clonagem de genes utilizando vários vectores e estirpes de células; preparação de DNA plasmídico, eletroforese em gel de agarose, análise de restrição.
Análise de artigos científicos originais relevantes, desenho experimental e análise de dados. Comunicação oral e elaboração de relatório escrito.

Modo de trabalho

Presencial

Programa

Estrutura dos genes e de sequências regulatórias. Regulação da expressão genética. Análise de sequências. Optimização de genes. Métodos de clonagem de DNA, enzimas de restrição e PCR. Clonagem baseada em PCR. Tecnologia Gateway. Vectores de clonagem. Vectores de expressão. Tagging de proteínas e proteínas de fusão. O sistema pET. Reguladores da expressão (promotores derivados do pLac; expressão do repressor por estirpes com alelo lacIq). Características genéticas de estirpes bacterianas adequadas a expressão de proteínas recombinantes.

Ferramentas básicas de bioinformática (BLAST search, análise de sequências, otimização de genes, desenho de primers).

Laboratório - Clonagem e expressão de gene(s) em E. coli. Isolamento de DNA plasmídico e respectiva análise por eletroforese em gel de agarose. Isolamento de genes por PCR. Restrição de DNA. Clonagem de DNA e transformação de E. coli. Rastreio de recombinantes por PCR (“colony PCR”). Análise preliminar de extractos proteicos bacterianos por Western blot.

Bibliografia Obrigatória

Videira Arnaldo 340; Engenharia genética. ISBN: 9789727577439

Bibliografia Complementar

Sambrook Joseph; Molecular cloning. ISBN: 978-087969-577-4 (Vol. 1)
Watson James D. 1928- 070; Recombinant DNA. ISBN: 9781429203128
Greenfield Edward A., 1957- 340; Antibodies. ISBN: 9781936113811

Observações Bibliográficas

A informação bibliográfica relevante sertá baseada em artigos científicos.

Métodos de ensino e atividades de aprendizagem

Os estudantes devem ser encorajados a envolverem-se em projectos, individuais ou de grupo, laboratoriais ou de pesquisa de informação, e a assumirem a iniciativa de investigar tópicos específicos. A utilização de exemplos reais de investigação e “case-studies” fornece o contexto da realidade e permite a aquisição da noção que a ciência é um contínuo de busca constante de respostas para questões que não se encontram nunca completamente resolvidas. As actividades incluem grupos de discussão, tutoriais, solução de problemas, debates, etc. Instrumentos de avaliação incluem apresentação e discussão de artigos científicos originais; um relatório respeitante ao projecto laboratorial desenvolvido e um exame final.

 

Palavras Chave

Ciências Naturais > Ciências biológicas > Engenharia biológica > Engenharia genética
Ciências Naturais > Ciências biológicas > Biologia > Biologia molecular
Ciências Naturais > Ciências biológicas > Biologia > Biologia funcional

Tipo de avaliação

Avaliação distribuída com exame final

Componentes de Avaliação

Designação	Peso (%)
Exame	85,00
Trabalho escrito	15,00
Total:	100,00

Componentes de Ocupação

Designação	Tempo (Horas)
Estudo autónomo	105,00
Frequência das aulas	42,00
Trabalho escrito	15,00
Total:	162,00

Obtenção de frequência

Frequência obrigatória das aulas (mínimo 3/4)

Fórmula de cálculo da classificação final

Fórmula de avaliação: Exame (17 valores) + Exercícios (3 valores).

Melhoria de classificação

Só o exame final é passível de melhoria de nota.

Observações

Professor Coordenador:
Luís Gustavo de Carvalho Pereira