| Resumo: |
A Helicobacter pylori é a principal causa de várias doenças gastroduodenais, mas dados recentes demonstaram a
presença de outras espécies bacterianas na mucosa gástrica e suco gástrico, o que significa que interações entre
essas espécies e a H. pylori são possíveis de ocorrer. Desta forma, o possível impacto da microbiota em doenças
gástricas precisa de ser melhor clarificado.
Para clarificar este paradigma, a técnica de Hibridação In Vivo Fluorescente (FIVH), foi recentemente aplicada
diretamente no estômago; no entanto, esta deteção foi limitada a uma única bacteria (H. pylori). Como o número de
microrganismos que podem ser detetados pela técnica de FISH é geralmente limitado a 2 ou 3, surgiu uma nova
tecnologia, designada de marcação combinatória e análise spectral (CLASI-FISH). No entanto, estas tecnologias
apresentam limitações associadas ao uso de sondas de DNA, as quais podem ser ultrapassadas tirando-se
vantagem das propriedades de hibridação dos mímicos de ácidos nucleicos (NAMs). Desta forma, neste projeto
propomos combinar as técnicas de FIVH e CLASI-FISH, usando-se sondas de NAMs (NAM-CLASI-FIVH), de forma
a desenvolver-se um procedimento robusto para o estudo da composição e organização espacial da microbiota
gástrica. No futuro, este novo método combinado com equipamentos sofisticados (p.ex., endomicroscopia confocal)
poderá ser útil para monitorizar ao longo do tempo o comportamento da microbiota gástrica diretamente no estômago
de modelos animais, sem os sacrificar.
Assim, como primeira tarefa, as sondas de NAMs a ser usadas na técnica de NAM-CLASI-FIVH serão desenvolvidas
e otimizadas em condições semelhantes às encontradas no estômago (p.ex., a pH baixo e a 37°C); em seguida, a
técnica será validada em biópsias gástricas. Posteriormente, o protocolo desenvolvido será testado e implementado
num modelo animal. Finalmente, como caso de estudo, pretende-se analisar as mudanças ocorridas na microbiota
gástrica (composição e organiz  |
Resumo
A Helicobacter pylori é a principal causa de várias doenças gastroduodenais, mas dados recentes demonstaram a
presença de outras espécies bacterianas na mucosa gástrica e suco gástrico, o que significa que interações entre
essas espécies e a H. pylori são possíveis de ocorrer. Desta forma, o possível impacto da microbiota em doenças
gástricas precisa de ser melhor clarificado.
Para clarificar este paradigma, a técnica de Hibridação In Vivo Fluorescente (FIVH), foi recentemente aplicada
diretamente no estômago; no entanto, esta deteção foi limitada a uma única bacteria (H. pylori). Como o número de
microrganismos que podem ser detetados pela técnica de FISH é geralmente limitado a 2 ou 3, surgiu uma nova
tecnologia, designada de marcação combinatória e análise spectral (CLASI-FISH). No entanto, estas tecnologias
apresentam limitações associadas ao uso de sondas de DNA, as quais podem ser ultrapassadas tirando-se
vantagem das propriedades de hibridação dos mímicos de ácidos nucleicos (NAMs). Desta forma, neste projeto
propomos combinar as técnicas de FIVH e CLASI-FISH, usando-se sondas de NAMs (NAM-CLASI-FIVH), de forma
a desenvolver-se um procedimento robusto para o estudo da composição e organização espacial da microbiota
gástrica. No futuro, este novo método combinado com equipamentos sofisticados (p.ex., endomicroscopia confocal)
poderá ser útil para monitorizar ao longo do tempo o comportamento da microbiota gástrica diretamente no estômago
de modelos animais, sem os sacrificar.
Assim, como primeira tarefa, as sondas de NAMs a ser usadas na técnica de NAM-CLASI-FIVH serão desenvolvidas
e otimizadas em condições semelhantes às encontradas no estômago (p.ex., a pH baixo e a 37°C); em seguida, a
técnica será validada em biópsias gástricas. Posteriormente, o protocolo desenvolvido será testado e implementado
num modelo animal. Finalmente, como caso de estudo, pretende-se analisar as mudanças ocorridas na microbiota
gástrica (composição e organização espacial) ao longo do tempo num modelo de ratinho infetado com H. pylori.
Do nosso conhecimento, é a primeira vez que uma marcação combinatória para uma deteção e localização in vivo
da microbiota diretamente no estômago, é sugerida, tornando este um projeto muito inovador e desafiante.
A equipa deste projeto inclui investigadores júniores e seniores, todos com excelentes conhecimentos nas respetivas
áreas de especialização. O investigador principal (PI), Andreia Azevedo, com experiência no desenho de sondas,
já desenvolveu alguns métodos de FISH para a deteção/localização de microorganismos in situ (ver CV). Nuno
Azevedo, do LEPABE/FEUP, recentemente expandiu os seus interesses de investigação para a aplicação de novos
NAMs na deteção da H. pylori (ver CV). O seu trabalho tem contribuído para o desenvolvimento de uma startup,
Biomode SA; Céu Figueiredo, do IPATIMUP/i3S, é internacionalmente reconhecida pelo seu trabalho em doenças
gástricas associadas a H. pylori (ver CV). |