| Resumo: |
As intoxicações alimentares decorrem da ingestão de alimentos contaminados com toxinas produzidos por agentes
microbianos. A deteção destas toxinas baseia-se em técnicas analíticas complexas e demoradas, ou em testes
imunológicos que têm limitações associadas ao desempenho dos anticorpos.
Aptâmeros são sequências de ácidos nucleicos em cadeia simples que possuem características de ligação únicas
às moléculas-alvo. Apresentam várias vantagens quando comparados com anticorpos, tais como maior afinidade e
síntese artificial muito simples. O desenvolvimento de aptâmeros recorre por norma a uma abordagem de seleção
interativa chamada de SELEX. Esta abordagem consiste no rastreio de uma biblioteca de oligonucleótidos, composta
por uma multiplicidade de fragmentos com diferentes sequências, até à seleção de uma única sequência. Esta
metodologia é tipicamente limitada a ácidos nucleicos naturais (DNA ou RNA), o que restringe a 4 nucleótidos
o número de combinações possíveis para cada posição. Aumentando as combinações possíveis, o número de
potenciais aptâmeros pode aumentar exponencialmente. Isto pode ser conseguido com recurso aos mímicos de ácido
nucleico (NAMs); moléculas sintéticas com variadas estruturas capazes de hibridar com sequências complementares
de DNA/RNA. Por exemplo, para uma sequência aleatória de 20nt, as combinações possíveis podem aumentar de
1E12 para 1E18 quando se utiliza apenas DNA ou uma mistura de DNA/NAM, respetivamente.
O principal objetivo desta proposta é aplicar uma nova metodologia de seleção de aptameros, baseada na síntese
de novo de uma biblioteca de sequências compostas por NAMs e num único passo de seleção de aptâmeros
específicos para toxinas alimentares. Esta abordagem permitirá criar uma plataforma para o desenvolvimento de
novos aptameros que combina a capacidade de reconhecimento dos aptameros com a diversidade dos NAMs.
Como caso de estudo, este projeto incidirá sobre as enterotoxinas de Staphylococcus (SE), m  |
Resumo
As intoxicações alimentares decorrem da ingestão de alimentos contaminados com toxinas produzidos por agentes
microbianos. A deteção destas toxinas baseia-se em técnicas analíticas complexas e demoradas, ou em testes
imunológicos que têm limitações associadas ao desempenho dos anticorpos.
Aptâmeros são sequências de ácidos nucleicos em cadeia simples que possuem características de ligação únicas
às moléculas-alvo. Apresentam várias vantagens quando comparados com anticorpos, tais como maior afinidade e
síntese artificial muito simples. O desenvolvimento de aptâmeros recorre por norma a uma abordagem de seleção
interativa chamada de SELEX. Esta abordagem consiste no rastreio de uma biblioteca de oligonucleótidos, composta
por uma multiplicidade de fragmentos com diferentes sequências, até à seleção de uma única sequência. Esta
metodologia é tipicamente limitada a ácidos nucleicos naturais (DNA ou RNA), o que restringe a 4 nucleótidos
o número de combinações possíveis para cada posição. Aumentando as combinações possíveis, o número de
potenciais aptâmeros pode aumentar exponencialmente. Isto pode ser conseguido com recurso aos mímicos de ácido
nucleico (NAMs); moléculas sintéticas com variadas estruturas capazes de hibridar com sequências complementares
de DNA/RNA. Por exemplo, para uma sequência aleatória de 20nt, as combinações possíveis podem aumentar de
1E12 para 1E18 quando se utiliza apenas DNA ou uma mistura de DNA/NAM, respetivamente.
O principal objetivo desta proposta é aplicar uma nova metodologia de seleção de aptameros, baseada na síntese
de novo de uma biblioteca de sequências compostas por NAMs e num único passo de seleção de aptâmeros
específicos para toxinas alimentares. Esta abordagem permitirá criar uma plataforma para o desenvolvimento de
novos aptameros que combina a capacidade de reconhecimento dos aptameros com a diversidade dos NAMs.
Como caso de estudo, este projeto incidirá sobre as enterotoxinas de Staphylococcus (SE), mas pode ser facilmente
adaptado a outras toxinas. Aptameros específicos para SE serão seleccionados a partir de bibliotecas com moléculas
NAM e depois avaliados em termos de especificidade, afinidade e limite de deteção. Os aptameros serão então
incorporados num ensaio portátil, que pode ser facilmente implementado na industria alimentar; e testados em
matrizes alimentares para validação e comparação com sistemas de deteção tradicionais. |