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As bactérias são conhecidas pela sua ubiquidade e plasticidade. As bactérias resistentes a antibióticos e os genes de resistência têm uma distribuição generalizada, sendo detectados em produtos alimentares, em ambientes domésticos, em animais de estimação e em humanos saudáveis. A água, sendo o habitat mais importante para as bactérias, representa o maior vector desta disseminação. Este estudo foi desenhado para estimar e caracterizar os níveis de resistência a antibióticos ao longo do circuito da água potável - da captação à torneira. Amostras de água serão colhidas no local de captação, depois do tratamento e da desinfecção, em diferentes locais da rede de distribuição, e de torneiras de edifícios com níveis diferentes de utilização de água, como hotéis, unidades de saúde ou casas particulares. A diversidade bacteriana ao longo do circuito da água será caracterizado através de PCR-DGGE com "primers" universais ou específicos de famílias de microrganismos. A sequenciação das bandas mais intensas/representativas indicará os grupos bacterianos mais abundantes nos diferentes locais do circuito. Bactérias pertencentes a diferentes grupos taxonómicos serão cultivadas em meios selectivos. Grupos de grande relevância em termos de colonização e de resistência a antibióticos, por exemplo, enterobactérias (ex. Enterobacter, Shigella, Klebsiella), bactérias Gram-negativas não-fermentadoras (ex. Acinetobacter, Burkholderia, Pseudomonas, Aeromonas) e Staphylococcus serão os mais focados neste estudo. No entanto, no caso de se observar que outros organismos como Campylobacter spp., Legionella spp. e micobactérias ambientais são prevalentes nas amostras, estas também serão cultivadas e analisadas. Cerca de 1000-2000 isolados obtidos de todo o circuito, desde a captação à torneira, serão caracterizados em termos da sua taxonomia e perfil de resistência a antibióticos. Os determinantes genéticos responsáveis pelos fenótipos de resistência a antibióticos observa  |
Resumo
As bactérias são conhecidas pela sua ubiquidade e plasticidade. As bactérias resistentes a antibióticos e os genes de resistência têm uma distribuição generalizada, sendo detectados em produtos alimentares, em ambientes domésticos, em animais de estimação e em humanos saudáveis. A água, sendo o habitat mais importante para as bactérias, representa o maior vector desta disseminação. Este estudo foi desenhado para estimar e caracterizar os níveis de resistência a antibióticos ao longo do circuito da água potável - da captação à torneira. Amostras de água serão colhidas no local de captação, depois do tratamento e da desinfecção, em diferentes locais da rede de distribuição, e de torneiras de edifícios com níveis diferentes de utilização de água, como hotéis, unidades de saúde ou casas particulares. A diversidade bacteriana ao longo do circuito da água será caracterizado através de PCR-DGGE com "primers" universais ou específicos de famílias de microrganismos. A sequenciação das bandas mais intensas/representativas indicará os grupos bacterianos mais abundantes nos diferentes locais do circuito. Bactérias pertencentes a diferentes grupos taxonómicos serão cultivadas em meios selectivos. Grupos de grande relevância em termos de colonização e de resistência a antibióticos, por exemplo, enterobactérias (ex. Enterobacter, Shigella, Klebsiella), bactérias Gram-negativas não-fermentadoras (ex. Acinetobacter, Burkholderia, Pseudomonas, Aeromonas) e Staphylococcus serão os mais focados neste estudo. No entanto, no caso de se observar que outros organismos como Campylobacter spp., Legionella spp. e micobactérias ambientais são prevalentes nas amostras, estas também serão cultivadas e analisadas. Cerca de 1000-2000 isolados obtidos de todo o circuito, desde a captação à torneira, serão caracterizados em termos da sua taxonomia e perfil de resistência a antibióticos. Os determinantes genéticos responsáveis pelos fenótipos de resistência a antibióticos observados em isolados bacterianos seleccionados serão sequenciados e identificados. Este procedimento permitirá a pesquisa/detecção destes determinantes ao longo do circuito da água, e constituirá a base para o desenvolvimento de um método para detecção de determinantes de resistência a antibióticos em populações bacterianas não cultiváveis ou difíceis de isolar, como aquelas "presas" em biofilmes. Numa tentativa para identificar a maior via e modo de disseminação e persistência de bactérias resistentes a antibióticos ao longo do circuito da água, avaliar-se-á a selecção clonal nas populações bacterianas cultiváveis. Bactérias da mesma espécie associadas a um fenótipo de resistência a antibióticos específico, que sejam detectadas ao longo do circuito da água (da captação à torneira) constituirão a base de uma investigação acerca do modo de disseminação da resistência a antibióticos. Isolados resistentes a antibióticos recuperados ao longo do circuito da água, que pertençam à mesma espécie e que apresentem o mesmo genótipo serão comparados por "multi-locus sequence typing" (MLST).
Este projecto tem por objectivo a obtenção de conhecimento acerca da ecologia de bactérias resistentes a antibióticos em água potável e será conduzido com o apoio de duas entidades - Águas de Douro e Paiva, responsável pela captação da água, tratamento, desinfecção e distribuição não municipal, e Serviços Municipalizados de Águas e Saneamento do Porto, responsável pela distribuição municipal da água potável. Estas entidades manifestaram o seu interesse e disponibilidade para fornecer as amostras de água e para prestar conselhos técnicos necessaries ao bom desenvolvimento da presente proposta. |