Impacto da preservação e criopreservação de tecido cardíaco na funcionalidade mitocondrial ao longo do tempo

• Type: Thesis
• Date: 2024-11-14

Authors

Rafael Eduardo Ferreira Merêncio (Author) FADEUP

Thesis

Impacto da preservação e criopreservação de tecido cardíaco na funcionalidade mitocondrial ao longo do tempo

Master's Degree

Dissertation

Scientific classification

FOS: Social sciences > Educational sciences

Other information

Resumo (PT): O presente trabalho teve como objetivo avaliar a função respiratória mitocondrial de frações de músculo cardíaco de ratos, armazenadas ao longo do tempo em diferentes tipos de soluções de preservação e criopreservação. Para o efeito, frações dos ventrículos esquerdos (VE) foram colhidas e avaliadas imediatamente, após 1, 3 e 7 dias de armazenamento em Custodiol (CO) e Hypothermosol (HT), na forma de fibras ou tecido, e após 1 e 2 meses em diferentes condições de criopreservação. Frações dos ventrículos direitos (VD) foram mantidas no sistema MyoDish e na forma de Living Myocardial Slices (LMS) e avaliadas a fresco e após 2 e 4 dias de armazenamento. A avaliação da funcionalidade mitocondrial foi realizada em Respirómetros de Alta Resolução (Oroboros O2k) segundo o protocolo SUIT-014. A preservação da funcionalidade respiratória mitocondrial associada ao complexo I em estado OXPHOS, até ao 3º dia, só foi garantida pelo CO a 4 ºC. Quanto à funcionalidade mitocondrial do complexo II, o CO a 4 ºC é a solução que melhor preserva amostras até ao 7º dia. Quanto à integridade da membrana externa mitocondrial, a metodologia mais eficaz foi a preservação das amostras na forma de LMS. A condição 1 foi a que se mostrou mais eficaz na criopreservação na funcionalidade mitocondrial do complexo I em estado OXPHOS até ao 1º mês, enquanto que relativamente ao complexo II todas as condições foram eficazes até ao 2º mês. Quanto à integridade da membrana externa mitocondrial, a condição 2 foi a que se mostrou mais eficaz. Tendo em conta os resultados obtidos, a utilização de diferentes métodos de preservação e criopreservação, a curto e a longo prazo, deve ser criteriosamente elegida em função dos objetivos específicos relativos à funcionalidade respiratória mitocondrial.

Abstract (EN): The present study aimed to evaluate the mitochondrial respiratory function of heart muscle fractions from mice, stored over time in different types of preservation and cryopreservation solutions and conditions. For this purpose, fractions of the left ventricles (LV) were collected and evaluated immediately, after 1, 3, and 7 days of storage in Custodiol (CO) and Hypothermosol (HT), either as fibers or tissue, and after 1 and 2 months under different cryopreservation conditions. Fractions of the right ventricles (RV) were stored in the MyoDish culture medium in the form of Living Myocardial Slices (LMS) and evaluated fresh and after 2 and 4 days of storage. The evaluation of mitochondrial respiratory functionality was carried out in HighResolution Respirometers (Oroboros O2k) according to the SUIT-014 protocol. Mitochondrial functionality associated with complex I in the OXPHOS state was only preserved by CO at 4 ºC up to the 3rd day. Regarding mitochondrial functionality of complex II, CO at 4 ºC was the solution that best preserved samples up to the 7th day. Concerning the integrity of the outer mitochondrial membrane, the most effective method was preserving the samples in the form of LMS. Condition 1 was the most effective for cryopreservation of mitochondrial functionality of complex I in the OXPHOS state up to the 1st month, while for complex II, all conditions were effective up to the 2nd month. However, and regarding the integrity of the outer mitochondrial membrane, condition 2 proved to be the most effective. Considering the obtained results, the use of different preservation and cryopreservation methods, both short and long term, must be carefully chosen based on the specific objectives related to mitochondrial respiratory functionality.

Language: Portuguese