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O projecto AdTech-P2 está concentrado sobre algumas das mais avançadas tecnologias de purificação de proteínas. As tecnologias de colunas monolíticas, de Leito Móvel Simulado (SMB) e de membrana são abrangidas. Um sistema modelo de albumina de soro bovino (BSA) e mioglobina será usado. O objectivo principal é a separação de quatro subclasses da glicoproteína imunoglobulina G (IgG), uma importante molécula efectora da resposta imune humoral no ser humano.
Com a aprovação do fármaco contra o cancro Rituxan para o tratamento de linfoma não-Hodgkin (LNH) de células B (NHL), em 1997, muitos outros anticorpos monoclonais (mAbs) têm sido considerados em terapias de cancro. A maioria dos produtos de mAbs em desenvolvimento é do isotipo IgG. Em consequência das diferenças estruturais, as quatro subclasses de IgG - IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 - apresentam diferenças em algumas de suas características físico-químicas e propriedades biológicas. Assim, seleccionar a apropriada subclasse do anticorpo com específicas características pode render anticorpos com aumentada segurança e eficácia.
A cromatografia líquida é uma das técnicas dominantes na separação de proteínas (cromatografia e permuta iónica, interacção hidrofóbica, cromatografia de fase inversa, etc.). Alguns suportes foram desenvolvidos com base nas vantagens da cromatografia de perfusão que combina maior eficiência de colunas cromatográficas e maior velocidade de separação. O desenvolvimento de monólitos é um passo nessa mesma direcção combinando canais com transporte convectivo e poros com transporte difusivo.
O conceito chave é o de "difusividade aumentada pela convecção" em materiais permeáveis de poros largos. Este projecto visa a separação e purificação de proteínas com ênfase na cinética de adsorção de misturas multi-componente de proteínas: (i) em materiais de poros largos com distribuição bimodal de tamanho de poros e (ii) em monólitos, ambos para aplicação em cromatografia em SMB com gradiente. SMB com  |
Resumo
O projecto AdTech-P2 está concentrado sobre algumas das mais avançadas tecnologias de purificação de proteínas. As tecnologias de colunas monolíticas, de Leito Móvel Simulado (SMB) e de membrana são abrangidas. Um sistema modelo de albumina de soro bovino (BSA) e mioglobina será usado. O objectivo principal é a separação de quatro subclasses da glicoproteína imunoglobulina G (IgG), uma importante molécula efectora da resposta imune humoral no ser humano.
Com a aprovação do fármaco contra o cancro Rituxan para o tratamento de linfoma não-Hodgkin (LNH) de células B (NHL), em 1997, muitos outros anticorpos monoclonais (mAbs) têm sido considerados em terapias de cancro. A maioria dos produtos de mAbs em desenvolvimento é do isotipo IgG. Em consequência das diferenças estruturais, as quatro subclasses de IgG - IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 - apresentam diferenças em algumas de suas características físico-químicas e propriedades biológicas. Assim, seleccionar a apropriada subclasse do anticorpo com específicas características pode render anticorpos com aumentada segurança e eficácia.
A cromatografia líquida é uma das técnicas dominantes na separação de proteínas (cromatografia e permuta iónica, interacção hidrofóbica, cromatografia de fase inversa, etc.). Alguns suportes foram desenvolvidos com base nas vantagens da cromatografia de perfusão que combina maior eficiência de colunas cromatográficas e maior velocidade de separação. O desenvolvimento de monólitos é um passo nessa mesma direcção combinando canais com transporte convectivo e poros com transporte difusivo.
O conceito chave é o de "difusividade aumentada pela convecção" em materiais permeáveis de poros largos. Este projecto visa a separação e purificação de proteínas com ênfase na cinética de adsorção de misturas multi-componente de proteínas: (i) em materiais de poros largos com distribuição bimodal de tamanho de poros e (ii) em monólitos, ambos para aplicação em cromatografia em SMB com gradiente. SMB com gradiente é uma forma auspiciosa para superar as ineficiências do processo isocrático e a aplicação de dois tipos de fases estacionárias irá demonstrar o potencial desta técnica para a recuperação de proteínas, em particular, de anticorpos monoclonais IgG.
O desenvolvimento de processos de separação de proteínas será também feito por análise do efeito da concentração de sal e de pH na fase móvel. O equilíbrio e cinética de adsorção de proteínas serão determinados experimentalmente (para o sistema modelo de BSA e mioglobina e a mistura multi-componente de subclasses IgG). Estes dados de base serão inseridos em um simulador desenvolvido para avaliar o comportamento (e o desempenho) do SMB e permitir o projecto da optimizada unidade de operação (configuração, parâmetros de operação, dimensionamento).
Para concentrar e produzir proteínas puras (isentas de sal) das correntes de saída do SMB com gradiente, uma etapa de separação por membranas será incluída. A eficiência desta etapa de filtração (UF ou MF) depende do cut-off da membrana e das condições de alimentação (concentração de sal, pH, força iónica) e, portanto, será aferida experimentalmente.
Um considerável número de trabalhos tem sido realizado para estabelecer métodos de purificação de anticorpos; a tecnologia de purificação de proteínas está ainda numa fase de grande expansão. Adicionalmente, há um grande interesse nas colunas monolíticas nas bio-separações preparativas. O Laboratório Associado LSRE/LCM, com a missão de inovação e desenvolvimento tecnológico, planeja expandir seus recentes desenvolvimentos no campo da separação e |